柱后衍生
衍生化是一種利用化學(xué)變換把化合物轉(zhuǎn)化成類似化學(xué)結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。一般來說，一個特定功能的化合物參與衍生反應(yīng)，溶解度，沸點，熔點，聚集態(tài)或化學(xué)成分會產(chǎn)生偏離。由此產(chǎn)生的新的化學(xué)性質(zhì)可用于量化或分離。
樣品的衍生化的作用主要是把難于分析的物質(zhì)轉(zhuǎn)化為與其化學(xué)結(jié)構(gòu)相似但易于分析的物質(zhì)，便于量化和分離。當(dāng)檢測物質(zhì)不容易被檢測時，如無紫外吸收等，可以將其進(jìn)行處理，如加上生色團(tuán)等，生成可被檢測的物質(zhì)。因而在儀器分析中被廣泛應(yīng)用。氣相色譜中應(yīng)用化學(xué)衍生反應(yīng)是為了增加樣品的揮發(fā)度或提高檢測靈敏度，而高效液相色譜的化學(xué)衍生法是指在一定條件下利用某種試劑(通稱化學(xué)衍生試劑或標(biāo)記試劑)與樣品組份進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，反應(yīng)的產(chǎn)物有利于色譜檢測或分離。
一般化學(xué)衍生法主要有以下幾個目的：
提高樣品檢測的靈敏度;
改善樣品混合物的分離度;
適合于進(jìn)一步做結(jié)構(gòu)鑒定，如質(zhì)譜、紅外或核磁共振等。
判斷衍生化反應(yīng)的指標(biāo)
1、反應(yīng)是否迅速、定量進(jìn)行，反應(yīng)重復(fù)性好壞，反應(yīng)條件是否溫和，是否容易操作。
2、反應(yīng)選擇性高，最好只于目標(biāo)化合物反應(yīng)。
3、衍生化產(chǎn)物只有一種，反應(yīng)的副產(chǎn)物和過量的衍生化試劑應(yīng)不干擾目標(biāo)化合物的分離和檢測。
4、衍生化試劑通用性好，價廉易得。
衍生化方法應(yīng)用不當(dāng)?shù)谋锥?/p>
1、柱上衍生化可能損傷色譜柱。
2、某些衍生化試劑需氮氣吹干。
3、衍生化不完全，影響靈敏度。
4、衍生化試劑不當(dāng)，產(chǎn)物分子量過大。
GC/MS檢測中選用衍生化試劑時，除了和氣相色譜法相同的準(zhǔn)則外，還應(yīng)注意衍生物的質(zhì)譜特性：質(zhì)量碎片特征性強(qiáng)，分子量適中，適合質(zhì)量型檢測器檢測，有利于與基質(zhì)干擾物的分離。
衍生化分類：
衍生化反應(yīng)從是否形成共價鍵來說，可分為兩種：標(biāo)記和非標(biāo)記反應(yīng)。
標(biāo)記反應(yīng)是在反應(yīng)過程中，被分析物與標(biāo)記試劑之間生成共價鍵;所有其它類型的反應(yīng)，如形成離子對、光解、氧化還原、電化學(xué)反應(yīng)等都是非標(biāo)記反應(yīng)。
另一種區(qū)分衍生化反應(yīng)是從衍生反應(yīng)的場所來分，有柱前衍生化(pre-columnderivatization)，柱上衍生化(on-columnderivatization)和柱后衍生化(post-columnderivatization)三種。
從是否與儀器聯(lián)機(jī)的角度來分有：在線(on-line)、離線(off-1ine)和旁線(at-line)(自動化)三種。
目前在HPLC中以離線的柱前衍生法(簡稱柱前衍生法)與在線的柱后衍生法(簡稱柱后衍生法)使用居多，旁線衍生化方法是發(fā)展方向。
柱前衍生和柱后衍生。
柱前衍生是在經(jīng)過分析柱前使分析物與衍生劑反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物在分析柱上實現(xiàn)分離，實際分離的是衍生產(chǎn)物，檢測的也是衍生產(chǎn)物;
柱后衍生是分離物在分析柱中實現(xiàn)分離后，在衍生池內(nèi)與衍生劑反應(yīng)，在柱子中分離的是目的物，在檢測器處檢測的衍生產(chǎn)物。
兩種衍生方法的優(yōu)缺點比較
柱前衍生法和柱后衍生法各有其優(yōu)缺點。
柱前衍生法的優(yōu)點是：
相對自由地選擇反應(yīng)條件;
不存在反應(yīng)動力學(xué)的限制;
衍生化的副產(chǎn)物可進(jìn)行預(yù)處理以降低或消除其干擾;
容易允許多步反應(yīng)的進(jìn)行;
有較多的衍生化試劑可選擇;
不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備。
缺點是：
形成的副產(chǎn)物可能對色譜分離造成較大困難;
在衍生化過程中，容易引入雜質(zhì)或干擾峰，或使樣品損失。
柱后衍生法的優(yōu)點有：
(1)形成副產(chǎn)物不重要，反應(yīng)不需要完全，產(chǎn)物也不需要高的穩(wěn)定性，只需要有好的重復(fù)性即可;
(2)被分析物可以在其原有的形式下進(jìn)行分離，容易選用已有的分析方法。
缺點是：
(1)對于一定的溶劑和有限的反應(yīng)時間來說，目前只有有限的反應(yīng)可供選擇;
(2)需要額外的設(shè)備，反應(yīng)器可造成峰展寬，降低分辨率。
GC/MS中的衍生化
在GC/MS方法分析樣品時，對羥基、胺基、羧基等官能團(tuán)進(jìn)行衍生化有十分重要的作用，主要表現(xiàn)在：
1、改善樣品的氣相色譜性質(zhì)。如羥基、羧基等氣相色譜特性不好。
2、改善樣品的熱穩(wěn)定性。
3、改善樣品的分子質(zhì)量。分子量增大，有利于樣品與基質(zhì)的分離。
4、改善樣品的質(zhì)譜行為。
5、引入鹵素或吸電子基團(tuán)，是樣品可用CI檢測，提高靈敏度。
6、分離手性化合物。
GC/MS方法中常用的衍生化方法：硅烷化、酯化、酰化和鹵化